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孔 霞1,王秀美1,隋爱华2,刘圆圆1
KONG Xia,WANG Xiumei,SUI Aihua,LIU Yuanyuan
摘要: 目的 探讨重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联合作用对人食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测恩度与紫杉醇联合用药48h后对Eca-109细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察恩度、紫杉醇单药与联合作用于人食管癌Eca-109细胞48h后细胞形态学的改变;Annexin V/PI双染流式细胞术检测恩度、紫杉醇不同用药组作用48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、p21、p53 mRNA的表达情况。结果恩度、紫杉醇作用于Eca-109细胞48h后的半数抑制浓度(IC50)分别为276.6627μg/ml和3.8789μg/ml。恩度单药组、紫杉醇单药组、恩度+紫杉醇组、恩度→紫杉醇组、紫杉醇→恩度组作用Eca-109细胞48h后的抑制率分别为(33.62±2.30)%、(49.14±1.45)%、(56.29±0.71)%、(41.88±1.23)%和(51.48±0.98)%;与阴性对照组比较,恩度、紫杉醇各加药组对Eca-109细胞均有明显的抑制作用(P<0.01);恩度+紫杉醇组的抑制率高于其他各组(P<0.05)。光镜下恩度、紫杉醇作用48h后Eca-109细胞具有典型的凋亡形态学改变,恩度单药组、紫杉醇单药组、恩度+紫杉醇组、恩度→紫杉醇组、紫杉醇→恩度组的总凋亡率分别为(8.78±0.19)%、(13.82±0.15)%、(18.88±0.29)%、(11.37±0.24)%和(14.88±0.34)%;恩度、紫杉醇各加药组的总凋亡率均高于阴性对照组(P<0.05);恩度+紫杉醇组的总凋亡率明显高于其他各组(P<0.01)。与阴性对照组比较,恩度单药组、紫杉醇单药组、两药序贯组的Bcl-2 mRNA表达均明显降低;恩度与紫杉醇联合用药组的Bax mRNA表达均降低;各用药组的p21 mRNA表达均降低;恩度与紫杉醇序贯用药组的p53表达降低。结论 恩度与紫杉醇联合可协同诱导人食管癌细胞的凋亡,其作用机制可能与下调凋亡抑制基因的表达有关。
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