吴秋芳,唐周舟,张定富
WU Qiufang, TANG Zhouzhou, ZHANG Dingfu.
摘要: 目的 探讨依维莫司(EVE)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 常规培养SiHa细胞达对数生长期后,采用终浓度为1、10、100 μmol/L EVE处理SiHa细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法测定对照组及不同浓度EVE处理24、48、72和96 h后的细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染联合流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同浓度EVE处理96 h的早期和晚期凋亡率及凋亡相关基因(Bax、Bad和Bcl-2)的表达情况,Western blotting和免疫荧光法检测各组处理96 h后的EMT相关标记分子包括上皮型钙粘附素(E-cad)、纤维连接蛋白(FN)和波形蛋白(Vim)的水平。结果 EVE在1~100 μmol/L范围内对SiHa细胞有增殖抑制作用,且增殖抑制率呈剂量和时间依赖性,除1 μmol/L作用24 h外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于对照组(P<0.05);与对照组相比,EVE处理96 h后的早期、晚期凋亡率及Bax、Bad的mRNA水平均升高,而Bcl-2 mRNA水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性;EVE处理后的E-cad水平均高于对照组,而FN和Vim水平均低于对照组(P0.05)。结论 采用EVE阻断mTOR通路对宫颈癌SiHa细胞有毒性作用,不仅抑制其增殖且诱导凋亡,可能与抑制其EMT过程有关。
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