唐鑫,汪俊谷,何新斌
TANG Xin,WANG Jungu,HE Xinbin
摘要: 目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默人类配对盒基因(PAX6)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 根据GenBank数据库中PAX6序列,设计、合成互补并特异性编码其 shRNA序列的寡核苷酸,克隆至线性化pSUPER. puro质粒载体中,将pSuper. puro PAX6 shRNA质粒(转染组)和阴性对照质粒pSuper. puro luciferase shRNA(阴性对照组)分别转染人MCF-7细胞,建立稳定低表达PAX6的MCF-7细胞株,同时设未行转染的MCF-7细胞为空白对照组。经实时定量PCR验证后,噻唑蓝(MTT)法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染后的细胞凋亡和细胞周期情况,采用Western blotting检测各组转染96 h后的EMT相关标记分子(E-钙粘蛋白、纤连蛋白和波形蛋白)水平。结果 转染组的PAX6水平均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);与其余两组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bax、Bad mRNA水平均升高,而抑制凋亡基因Bcl-2 mRNA水平降低,且细胞周期的G0/G1期细胞比例升高,但S期和G2/M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);转染组的钙粘蛋白水平升高,而纤连蛋白和波形蛋白水平均降低,与其余两组的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 通过shRNA抑制PAX6基因表达可抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对EMT过程有一定抑制效果,为乳腺癌的基因沉默靶向治疗提供了依据。
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