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巩艳青,宁向辉,丁义,郭应禄
GONG Yanqing, NING Xianghui, DING Yi, GUO Yinglu
摘要: 目的 探讨卷曲螺旋结构域蛋白34(CCDC34)的表达对膀胱癌细胞生物学行为包括增殖、凋亡、克隆形成和侵袭能力的影响。方法 选取膀胱癌5637细胞分别转染阴性对照siRNA(阴性对照组)和CCDC34siRNA(CCDC34干扰组)慢病毒载体,荧光显微镜观察慢病毒感染效率;实时荧光定量PCR和Western blotting验证CCDC34的干扰效率;BrdU掺入实验、流式细胞术、克隆形成实验和Transwell小室侵袭实验检测干扰CCDC34表达对5637细胞增殖、凋亡、克隆形成及侵袭能力的影响。结果 阴性对照组与CCDC34干扰组的慢病毒感染效率均在85%以上。与阴性对照组相比,感染CCDC34siRNA的细胞中CCDC34 mRNA表达水平受到显著抑制(1.00±0.06 vs. 0.16±0.01,P<0.01),且CCDC34蛋白表达下降。BrdU实验显示,CCDC34干扰组的细胞增殖能力较阴性对照组受到显著抑制(P<0.05),且细胞凋亡显著增加[(28.09±0.39)% vs.(9.50±0.01)%,P<0.01)]。克隆形成实验显示,CCDC34干扰组的克隆形成能力显著低于阴性对照组(22±4 vs.310±5,P<0.01)。Transwell小室侵袭实验显示,CCDC34干扰组膀胱癌细胞的侵袭转移率显著低于阴性对照组(0.53±0.03 vs.2.58±0.10,P<0.01)。结论 慢病毒介导的RNA干扰技术可下调CCDC34蛋白在膀胱癌5637细胞中的表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力;CCDC34有望成为膀胱癌的生物标记物和治疗的新靶点。
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