左强1,曹梦苒2,罗荣城1
摘要: 目的 探讨鼻咽癌PTEN 和survivin 基因与西妥昔单抗耐药的相关性。方法 以人鼻咽癌细胞株5-8F 细胞为研究对象,采用逐步增加剂量法诱导建立西妥昔单抗耐药细胞5-SF/Erbitux; MTT法检测西妥昔单抗对细胞的半数抑制浓度IC50,计算耐药指数(RI);计数法描绘生长曲线,计算倍增时间;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot 法检测细胞PTEN、survivin 的表达;实时荧光定量PCR (QPCR)检测细胞PTEN、survivin 基因的表达量;测序方法检测细胞PTEN 基因第5、7、8 外显子是否突变。结果 建立西妥昔单抗耐药的人鼻咽癌细胞系5-8F / Erbitux,西妥昔单抗作用3 天和5 天的RI 分别为1.2 和1.1 , 5-8F与5-8F/Erbitux 细胞的倍增时间分别为26.63h 和142.30h ; 5-8F Erbitux 的G0/Gl期比例显著增高(P<0. 001) , S 期比例显著下降(P<0.001) , G2/M 期比例下降,但差异不显著(P>0.05) ; 5-SF / Erbitux 细胞PTEN 蛋白表达水平显著升高(P<0.001) , survivin 蛋白表达水平显著下降(P<0.001) ; Survivin 基因表达量显著下降(P=0.000) , PTEN 基因表达量有所升高,但差异不显著(P=0.085)。通过比对,5-SF/Erbitux 细胞PTEN 基因第5、7、8 外显子未见突变。结论 西妥昔单抗可通过增强PTEN 的表达和降低survivin 的表达抑制鼻咽癌细胞增殖。鼻咽癌PTEN 缺失或突变以及survivin 过表达与西妥昔单抗耐药无关。
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