临床肿瘤学杂志

• 论著 •    下一篇

稳定干扰αv整合素表达的HT-29细胞系的建立

何建明,江 恒,庞学利,肖 红,陈克力,胡绍毅,黄海辉,梁后杰   

  1. 400038 重庆 第三军医大学西南医院肿瘤科
  • 收稿日期:2010-11-09 修回日期:2011-01-09 出版日期:2011-04-25 发布日期:2011-04-25
  • 通讯作者: 梁后杰

  • Received:2010-11-09 Revised:2011-01-09 Online:2011-04-25 Published:2011-04-25

摘要: 目的 探讨逆转录病毒介导RNA干扰(RNAi)稳定抑制αv整合素表达的有效性,并建立稳定抑制αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系。方法 设计并合成3对针对αv整合素基因的短发夹RNA(shRNA)序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT-29;G418筛选,局部消化法挑选阳性克隆;Westernblotting检测蛋白表达水平。结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被HindⅢ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800bp片段。测序结果显示,针对αv整合素基因的3对shRNA序列皆成功插入逆转录病毒质粒;转染逆转录病毒载体的HT-29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Westernblotting结果显示逆转录病毒介导的shRNA能有效地抑制αv整合素表达。结论 逆转录病毒介导的shRNA能够高效、稳定地抑制αv整合素表达,进而可以建立稳定干扰αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系。

No related articles found!
Viewed
Full text


Abstract

Cited

  Shared   
  Discussed   
No Suggested Reading articles found!