摘要: 目的:构建HMGB1表达载体,转染结肠癌细胞,研究其对结肠癌细胞中血管内皮生长因子D(VEGF-D)表达的影响。方法:将分离得到的淋巴细胞总RNA反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到HMGB1基因;随后酶切转入载体pMD18T,通过亚克隆转入载体pLxsn,得到重组质粒。重组体质粒经酶切鉴定后,并对插入的HMGB1基因片段进行测序,将已鉴定的阳性重组质粒用脂质体介导转染HCT116细胞。通过RT-PCR和Westernblotting检测HMGB1和VEGF-D的表达情况。结果:成功构建含HMGB1的表达载体。RT-PCR和Westernblotting检测发现转染表达HMGB1载体的HCT116细胞中HMGB1和VEGF-D的表达均增高。结论:HMGB1可以通过促进结肠癌细胞中VEGF-D的表达,诱导淋巴管生成,从而促进其淋巴结转移。
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