石永国1,2,卞卫和3,何烨2,丁洁2,周晶4,王科明2
SHI Yongguo,BIAN Weihe,HE Ye,DING Jie,ZHOU Jing,WANG Keming
摘要: 目的 探讨miR-206对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响及其作用机制。
方法 转染miR-206 mimic和miR-NC至乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测miR-206相对表达水平;应用MTT法、克隆形成实验检测miR-206对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-206对细胞周期的影响;Western blotting进一步验证miR-206对周期相关蛋白CyclinD2的影响。
结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-206 mimic转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞48h后miR-206的相对表达水平为10.2±1.5。MTT法检测结果显示,miR-206 mimic转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞6、24、48、72、96h后的增殖抑制率分别为(0±0.01)%、(0.12±0.03)%、(0.21±0.08)%、(0.28±0.11)% 和(0.39±0.16)%;克隆形成实验结果显示,miR-206 mimic和miR-NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞2周后的克隆数目分别为106±35和843±143,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,miR-206 mimic转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞48h后,明显地阻滞细胞周期于G1期;Western blotting检测显示miR-206表达下调了细胞周期蛋白CyclinD2的表达。结论 miR-206明显抑制了三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖,其机制可能与下调细胞周期蛋白CyclinD2的表达有关,这将成为乳腺癌临床治疗一个新的靶点。
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