崔巍,丁振,谷振芳,王军业
CUI Wei, DING Zhen, GU Zhenfang, WANG Junye
摘要: 目的 探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制去泛素化酶3(Dub3)基因表达对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 优化siRNA转染条件,将2条靶向抑制Dub3基因的siRNA载体片段(siRNA-1、siRNA-2)分别高效转染人鼻咽癌CNE-2细胞,同时设转染无义序列的空转染组及无任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时定量PCR(qPCR)检测Dub3表达水平以筛选抑制率高的感染载体用于后续试验。噻唑蓝法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡和细胞周期情况,采用Western blotting检测各组转染96 h后细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的表达情况。结果 转染组的Dub3 mRNA水平均低于空转染组和对照组(P<0.05),且选择干扰效率高的siRNA-1载体进行功能学研究;与其余两组相比,抑制组转染后的增殖抑制率、凋亡率及caspase-3活化率均升高,且G0/G1期细胞比例升高,但S期和G2/M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);抑制组转染后的Cdc25A 水平降低,与空载体组和对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。空载体组和对照组以上指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 通过siRNA抑制Dub3基因表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对鼻咽癌的防治有一定价值。
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