王 鈜1,王春平1,毕京峰2,高旭东1,陆荫英1,曲建慧1,白文林1,许桂林1,曾 珍1,楼 敏1,杨永平1
WANG Hong, WANG Chun-ping, BI Jing-feng, GAO Xu-dong, LU Yin-ying, QU Jian-hui, BAI Wen-lin, XU Gui-lin, ZENG Zhen, LOU Min, YANG Yong-ping
摘要: 目的 研究用人骨髓诱导培养内皮祖细胞(EPCs)并以其作为免疫性基因载体治疗肿瘤的可行性。方法 采用梯度离心法从人骨髓中分离单个核细胞,加入人血管内皮生长因子(VEGF165)诱导培养,用流式细胞仪测定细胞表面标志CD133、KDR和CD34的表达情况。以增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为报告基因,用流式细胞仪检测携带EGFP基因的腺病毒载体(Ad-EGFP)对EPCs的感染效率。携带人干扰素γ(hγIFN)基因的腺病毒载体(Ad-hγIFN)感染EPCs(EPCs-hγIFN),ELISA法检测细胞EPCs-hγIFN分泌 hγIFN的情况。将EPCs-hγIFN与肺癌细胞株H460、胃癌细胞株SGC7901、大肠癌细胞株LoVo混合培养,观察EPCs-hγIFN对肿瘤细胞的作用。结果 经过诱导培养2周后,贴壁的单核细胞开始表达CD133、KDR和CD34。Ad-EGFP的感染复数(MOI)为150pfu/EPCs时,感染率达90%以上。EPCs-hγIFN培养上清可以测得浓度稳定且高水平的hγIFN,第1天上清液中的hγIFN浓度为1305.28pg/ml,第14天为1419.10pg/ml。EPCs-hγIFN与H460、SGC7901、LoVo细胞株混合培养4天,肿瘤细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞存活率分别为(77.87 ± 6.50)%、(79.36 ± 4.35)%和(69.52 ± 3.78)%, 均显著低于对照组(P<0.05)。结论携带hγIFN目的基因的腺病毒转染EPCs后基因表达情况良好,体外实验中表现为抑制肿瘤细胞的生长,可作为免疫性基因载体开展进一步的研究。
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