王晓先1,孔凡君2,李飞3,张硕4
WANG Xiaoxian, KONG Fanjun, LI Fei, ZHANG Shuo
摘要: 【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素(ADM)耐药乳腺癌细胞系MCF-7/ADM中的表达情况及其对MCF-7/ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7/ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR(qPCR)比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1(+)miR-490-3p瞬时转染至MCF-7/ADM细胞(过表达组)后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1(-)空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1(+)miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7/ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V/FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp),乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7/ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03(P<0.05);过表达组瞬时转染24~96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组(P<0.05);过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为(17.52±1.87)%、(31.67±2.79)%、(45.09±1.88)%和(61.82±2.52)%,高于空载体对照组(P<0.05);ADM对过表达组的IC50值为(11.27±2.34)μg/ml,低于空白对照组的和空载体对照组(P<0.05),且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7/ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。
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