miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

临床肿瘤学杂志 ›› 2019, Vol. 24 ›› Issue (2): 97-101.

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miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

1 471003 河南洛阳河南科技大学第一附属医院肿瘤内科

2 450003 郑州大学附属肿瘤医院河南省肿瘤医院肿瘤内科

收稿日期:2018-09-05 修回日期:2018-10-31 接受日期:2018-10-31 出版日期:2019-02-28 发布日期:2019-03-18
基金资助:
*基金项目：国家自然科学基金资助项目（81172240）

Experimental study on the effect of miR-21 targeting Atg5 on the proliferation， migration and invasion of non-small cell lung cancer A549 cells by regulating autophagy

Department of Oncology， the First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology， Luoyang 471003，China

Received:2018-09-05 Revised:2018-10-31 Accepted:2018-10-31 Online:2019-02-28 Published:2019-03-18

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞， CCK-8检测细胞增殖情况；划痕实验检测细胞迁移能力； Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果与NC组比较，miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调，miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示，miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05），但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后，并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059，低于miR-21 mimics组的1.98±0.077，高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）；NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021，高于miR-21 mimics组的0.45±0.020，低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）；NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025，高于miR-21 mimics组的0.38±0.014，低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较， 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）；划痕实验和Transwell实验表明，3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词: 非小细胞肺癌, miR-21, 自噬, 增殖, 凋亡

Abstract: Objective To investigate the mechanism of miR-21 regulating autophagy of non-small cell lung cancer（NSCLC） by targeting autophagy-related target gene 5 （Atg5） and its role in proliferation， migration and invasion of A549 cells. Methods Nonsense nucleic acid sequence NC （NC group）， miR-21 mimics （miR-21 mimics group） and miR-21 inhibitor（miR-21 inhibitor group） were transfected into A549 cells， respectively. CCK-8 was used to detect the proliferation of A549 cells， scratch test was used to detect the migration ability of A549 cells， and Transwell invasion test was used to detect the invasion ability of A549 cells. Dual luciferase reporter gene assay verified the targeting relationship between miR-21 and Atg5. Western blotting was used to detect the expression of LC3B-II， p62 and Atg5 proteins. Results Compared with NC group， the proliferation， migration and invasiveness of the cells in the miR-21 mimics group were up-regulated， while the proliferation， migration and invasiveness of the cells in the miR-21 inhibitor group were down-regulated （P＜0.05）. The results of double luciferase report experiment showed that miR-21 significantly inhibited the luciferase activity of wild-type Atg5 3’-UTR plasmid transfected cells （P＜0.05）， but had no effect on the luciferase activity after co-transfection of mutant Atg5 3’-UTR gene report plasmid with miR-21 mimics. The expression of LC3B-II protein in NC group was lower than that in miR-21 mimics group， higher than that in miR-21 inhibitor group （P＜0.05）； the expression of p62 and Atg5 protein in NC group was higher than that in miR-21 mimics group， lower than that in miR-21 inhibitor group （P＜0.05）. Compared with NC group， 3-MA treatment decreased the proliferation of A549 cells induced by miR-21 mimics transfection （P＜0.05）. Scratch and Transwell experiments showed that 3-MA treatment inhibited the migration and invasion of A549 cells induced by miR-21 mimics transfection （P＜0.05）. Conclusion MiR-21 targeting Atg5 regulates autophagy in non-small cell lung cancer cells and promotes proliferation， migration and invasion of lung cancer cells.

Key words:

Non-small cell lung cancer（NSCLC）')">"> Non-small cell lung cancer（NSCLC）, miR-21, Autophagy, Proliferation, Apoptosis

中图分类号:

R734.2

高晓会, 张亚利, 张治业, 郭艳珍, 陈小兵. miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究[J]. 临床肿瘤学杂志, 2019, 24(2): 97-101.

GAO Xiaohui, ZHANG Yali, ZHANG Zhiye, GUO Yanzhen, CHEN Xiaobing..

Experimental study on the effect of miR-21 targeting Atg5 on the proliferation， migration and invasion of non-small cell lung cancer A549 cells by regulating autophagy [J]. Chinese Clinical Oncology, 2019, 24(2): 97-101.

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miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

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