目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）基因表达对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的影响。方法 优化siRNA转染条件，将3条靶向抑制CDCA5基因的siRNA载体片段（序列1、2和3）分别高效转染人肝癌HepG2细胞（A、B和C组），并设阴性对照组（NC组）及空白组。免疫印迹法检测转染72h各组CDCA5蛋白的表达水平。CCK-8法检测转染24、48、72、96、120h各组细胞的增殖能力，Annexin V-FITC／PI 双标记流式细胞术检测各组转染48h的凋亡情况。结果 A、B和C组的CDCA5蛋白水平均低于NC组和空白组（P＜0.05），其中B组的表达率最低，抑制率最高，达89.3％，故选择序列2进行后续实验。自转染48h起，B组的相对增殖率均低于NC组和空白组（P＜0.05）；B组转染72h的相对增殖率为（66.58±2.58）％，均低于其他观察时间点（P＜0.05）。B组转染48h的早期和晚期凋亡率分别为（17.43±2.31）％和（22.37±2.21）％，均高于NC组和空白组（P＜0.05）。 结论 通过siRNA能够降低HepG2细胞的CDCA5表达水平，有效抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。

目的 检测转移相关基因1（MTA1）蛋白在小细胞肺癌（SCLC）组织中的表达情况，探讨其在SCLC转移、预后和化疗敏感性预测中的作用。方法 采用免疫组织化学法检测52例无远处转移SCLC组织标本中MTA1的表达，根据免疫组化结果分为两类：低表达（≤6分）和高表达（＞6分）；分析MTA1表达水平与临床病理特征、EP方案（足叶乙甙100mg/m2静滴，d1～d5；顺铂60mg／m2静滴，d1，3周为1周期，共4～6个周期）化疗疗效及预后的关系。结果 52例SCLC组织中MTA1高表达率为71.2％（37／52），18例癌旁组织均为低表达（100.0％）；MTA1表达在不同肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移与否和有无脉管侵犯之间的差异有统计学意义（P＜0.05），而在性别、年龄、VALG分期及肿瘤部位之间的差异无统计学意义（P＞0.05）；MTA1高表达组的EP方案化疗敏感率低于MTA1低表达组（54.1％ vs. 80.0％，P=0.020）；MTA1低表达组的中位无进展生存期和总生存期均优于MTA1高表达组（20个月vs.8个月，33个月vs.18个月），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 MTA1在SCLC组织中高表达，且与肿瘤转移、耐药及预后密切相关。

目的 探讨醉茄素A（WFA） 对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 采用0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA 处理A549细胞，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测上述浓度处理24、48、72和96h的细胞增殖抑制率，Hoechst染色和磷酯酰丝氨酸结合蛋白异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin V-FITC／PI）检测各浓度组48h的细胞凋亡情况，流式细胞仪检测各浓度组48h的细胞周期分布情况，免疫印迹检测各浓度组48h凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）和PI3K／Akt信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 WFA 可抑制细胞增殖，并呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）；0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA作用48h后A549细胞的凋亡指数分别为2.75±0.64、4.61±1.36、9.75±2.78、12.92±3.42和18.68±4.31，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。除2.5μmol／L外，其余浓度组的早、晚期凋亡率、凋亡促进基因（Bax和Cleaved caspase-3）水平及G0／G1期细胞比例均高于0μmol／L，凋亡抑制基因Bcl-2水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）； 2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。随着浓度升高，p-Akt／Akt值呈降低趋势，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 WFA能够抑制A549细胞的增殖及凋亡，可能通过抑制PI3K／Akt通路激活实现。

目的 探讨PIK3CA和C-KIT基因突变与乳腺癌伴腋窝淋巴结转移患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集84例乳腺癌伴淋巴结转移患者术后存档癌组织石蜡标本，采用Ion Torrent测序技术检测其PIK3CA、C-KIT基因的突变情况（突变率及突变位点分布）；分析两种基因突变与临床病理特征（年龄、月经、淋巴结转移数、癌栓、肿瘤大小、临床分期、ER／PR和HER-2表达情况）的关系；根据突变情况分组（突变组和未突变组），随访3年无瘤生存率。结果 PIK3CA、C-KIT基因突变率分别为63.1％（53／84）和15.5％（13／84），均为错义突变；其中PIK3CA第9、13和20号外显子突变依次有7、8和24例，第13、20号外显子双突变共14例，而C-KIT基因突变均位于第10号外显子。两基因突变均与HER-2表达有关，仅PIK3CA与临床分期和ER／PR表达有关，但其各外显子突变与临床病理特征无关。PIK3CA基因突变组的3年无瘤生存率为75.5％，未突变组为48.4％；而C-KIT基因突变组与未突变组分别为76.9％和62.0％，两种基因不同突变情况的差异均无统计学意义（P＞0.05）。年龄、月经、淋巴结转移数、肿瘤大小、临床分期、ER／PR表达、HER-2表达、PIK3CA基因突变和C-KIT基因突变均不是影响乳腺癌伴淋巴结转移患者预后的独立因素。结论 乳腺癌伴腋窝淋巴结转移患者PIK3CA的基因突变率较高，与临床分期、ER／PR及HER-2表达有关；C-KIT仅与HER-2表达有关，两种基因突变可能在乳腺癌的发生发展及腋窝淋巴结转移中起一定作用。

目的 通过检测不同自然杀伤细胞（NK细胞）亚群在肝细胞癌（HCC）外周血和肿瘤微环境中的变化规律，探讨NK细胞亚群与HCC疾病进展的关系。方法 流式细胞术检测40例HCC患者外周血、癌组织及癌旁组织中CD3-CD56+、CD3-CD57+、CD3-CD161+NK细胞亚群的含量，并收集36例健康志愿者的外周血作为对照。免疫组化法检测10例HCC癌组织和癌旁组织及3例肝良性肿瘤患者正常肝脏组织中CD3-CD56+NK细胞的分布。结果 流式细胞术检测显示，HCC组织CD3-CD56+和CD3-CD57+NK细胞比例分别（20.6±10.4）％ 和（6.9±3.7）％，低于癌旁组织中的（27.9±13.5）％和（9.6±5.1）％，差异有统计学意义（P＜0.05）；CD3-CD161+NK细胞在HCC癌组织和癌旁组织中含量的差异无统计学意义（P＞0.05）。3种NK细胞亚群在HCC患者外周血中的含量高于健康志愿者，但差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化染色显示，癌旁组织中有大量CD3-CD56+NK细胞浸润，在HCC组织中只有少量分布，均少于在肝良性肿瘤的正常肝脏组织中的分布。Ⅰ+Ⅱ期HCC组织中NK细胞的比例高于Ⅲ+Ⅳ期，以CD3-CD56+及CD3-CD161+NK细胞为主。NK细胞不同亚群的比例与性别、甲胎蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、TNM分期、白细胞计数、肝炎病毒感染、病灶数量无明显相关（P＞0.05）。结论 NK细胞比例下降与HCC患者的自然免疫下降及肿瘤进展有关。

目的 观察重组人血管内皮抑制素（恩度）间插联合顺铂腹腔内注射治疗小鼠腹水瘤的疗效和安全性。方法 采用肝细胞癌H22腹水瘤细胞株建立小鼠腹水瘤模型。120只造模后的ICR小鼠随机分为4组：对照组（生理盐水d1～d10）、恩度组（恩度8mg／kg，d1～d5，d7～d10，生理盐水d6）、顺铂组（顺铂004mg／kg，d6，生理盐水d1～d5，d7～d10）及恩度联合顺铂组（恩度8mg／kg，d1～d5，d7～d10；顺铂0.04mg／kg，d6），每组30只，每只小鼠腹腔注射的药物体积均为0.2ml。记录各组小鼠腹水体积、腹水中肿瘤细胞、红细胞计数以及生存期；观察各组荷瘤小鼠腹膜和腹腔脏器种植转移情况；检测各组小鼠的腹膜渗透性、血常规和肝肾功能；流式细胞仪检测各组小鼠腹腔积液中肿瘤细胞凋亡情况。结果 与对照组相比，恩度组和顺铂组和恩度联合顺铂组均能减少荷瘤小鼠腹腔积液的体积、肿瘤细胞数和红细胞数，延长荷瘤小鼠的生存时间。在上述指标中，恩度联合顺铂组与恩度组和顺铂组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。恩度联合顺铂组小鼠腹腔积液中肿瘤细胞的凋亡率显著高于恩度组和对照组（P＜0.05），但与顺铂组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；恩度联合顺铂组小鼠的腹膜渗透性明显低于顺铂组和对照组（P＜0.05），但恩度联合顺铂组与恩度组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。恩度联合顺铂组小鼠的体重增加及腹腔种植转移均少于其他3组。各组小鼠均未出现血常规和肝肾功能明显异常。结论 恩度间插联合顺铂腹腔内应用治疗小鼠H22腹水瘤疗效显著，安全性好。

目的 探讨人钠耦合中性氨基酸转运蛋白1（SNAT1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义。方法 构建含98例NSCLC组织芯片，免疫组化检测NSCLC组织和癌旁正常组织中SNAT1蛋白的表达，分析其表达与NSCLC临床病理特征及患者生存之间的关系。构建sh-SNAT1表达载体质粒转染肺癌A549细胞，分别用MTT法和克隆形成实验检测敲除SNAT1表达后其增殖能力的变化。结果 NSCLC组织中SNAT1阳性表达率为53.1％（52／98），而癌旁正常组织中不表达。NSCLC组织中SNAT1表达与淋巴结转移、分期和分化程度均呈正相关，其中SNAT1蛋白阳性表达患者的中位总生存时间为23.3个月，明显低于阴性表达者的40.5个月（P＜0.001）。敲除SNAT1表达时NSCLC细胞的增殖能力显著减弱。
结论 SNAT1在NSCLC发生发展过程中过度活化，是评估NSCLC患者预后的重要指标之一。

目的 探讨不同组织保存状态（原始样本或基因组DNA）及保存时间对非小细胞肺癌（NSCLC）中表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测结果的影响。方法 收集EGFR基因突变阳性NSCLC患者的新鲜冰冻组织和石蜡包埋（FFPE）组织各10例，每保存1个月提取1次DNA（共12次），设为冰冻新提取组和FFPE新提取组；同时分别选取初检后剩余基因组DNA作对照，设为冰冻预留组和FFPE预留组。分别采用检测试剂盒定性和定量检测上述4组EGFR基因的突变情况，同时采用荧光定量PCR技术检测内参基因的Ct值。比较4组不同保存时间的内参基因Ct值和EGFR基因突变频度情况。结果 20例原始组织样本均可以检出EGFR基因突变，与临床信息相符。新鲜冰冻组织、FFPE组织的DNA浓度均＞50ng／μl，且A260／A280为1.8±0.2。新鲜冰冻组织保存10个月后，冰冻预留组的内参基因Ct值高于冰冻新提取组，差异有统计学意义（P＜0.05）；FFPE保存12个月内，FFPE新提取组和FFPE预留组内参基因Ct值的差异均无统计学意义（P＞0.05）。冰冻新提取组保存6个月后和FFPE新提取组保存4个月后的EGFR基因突变频度高于对应预留组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 原始样本相对于预留基因组DNA更适合用于回顾性研究的材料。

目的 系统评价环氧合酶-2（COX-2）-765G＞C位点基因多态性与消化系统肿瘤易感性的关系。方法 计算机检索PubMed、EMBASE、Web of Science数据库的文献，收集2013年2月前所有关于COX-2基因多态性与消化系统肿瘤易感性的研究。采用Stata/SE 12.0 软件进行Meta分析。结果 共检索出84篇相关文献，其中40篇可纳入研究，共计11 083例消化系统肿瘤患者和16 856例对照人群。总研究人群分析显示，与G等位基因、GG基因型相比，COX-2-765G＞C位点C等位基因及CG、CC／CG基因型显著增加了消化系统肿瘤的罹患风险。按人种、肿瘤发生部位的分层分析显示，C等位基因及CG、CC／CG基因型显著增加了亚洲人种消化系统肿瘤及总研究人群消化道肿瘤的罹患风险，未观察到COX-2-765G＞C基因多态性与高加索人种消化系统肿瘤及总研究人群消化系统肿瘤的易感性相关。按对照组来源分层分析显示，C等位基因及GC基因型显著增加了基于人群（PB）对照来源的亚组消化系统肿瘤的罹患风险，未观察到COX-2-765G＞C基因多态性与基于医院（HB）对照来源的亚组消化系统肿瘤的易感性相关。结论 COX-2-765G＞C 基因多态性显著增加亚洲人种的消化系统肿瘤罹患风险。

目的 探讨LRP15基因在胃癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法 采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测90例胃癌组织及对应癌旁组织中LRP15的表达情况，Kaplan-Meier法进行生存分析， Cox模型评估影响预后的因素。结果 胃癌组织和癌旁组织中LRP15的表达存在显著性差异（0.563±0.046 vs. 0.822±0.054，P＜0.001）。按照胃癌组织和癌旁组织LRP15的比值，将90例患者分为高表达组（比值≥0.5，n=51）和低表达组（比值＜0.5，n=39）。LRP15的表达与肿块大小（P=0.038）、淋巴结转移（P=0.005）有关，与性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、大体分型、TNM分期和浸润深度无关（P＞0.05）。高表达者的中位总生存时间为37.3个月，高于低表达者的27.6个月（P=0.040）。Cox模型分析显示，癌组织中LRP15的相对表达量、癌组织与癌旁组织LRP15表达量的比值、淋巴结转移和浸润深度均是影响预后的独立因素。结论 LRP15可能在胃癌生长和淋巴结转移中发挥重要作用，有望成为胃癌预后预测的标志物及靶向治疗的新靶点。